Bạn đang xem: Flow cytometry là gì
FASC (Flourescent activated cell sorters) là các sản phẩm đếm tế bào theo dòng chảycó chức năng phân một số loại những cố gắng bào được đánh dấu huỳnh quang xuất phát điểm từ một hỗn hợp cácquần thể tế bào.trước hết, những phân tử sẽ tiến hành đưa tới đèn laze vào mộtdòng hóa học lỏng. Bất kỳ hạt hòa hợp hoặc tế bào nào có size tự 0.2-150 µmmọi phù hợp; các tế bào từ những mô rắn yêu cầu được vứt bỏ trước lúc đối chiếu.Khi các phân tử đi qua tia laze, chúng tán xạ ánh sáng Laser, ánh nắng tán xạ với ánhsáng sủa huỳnh quang sẽ tiến hành thu tại thấu kính trên địa điểm tương thích. Sự phối kết hợp giữaphần tử tách bóc chùm tia với những kính lọc vẫn hướng ánh nắng tán xạ cùng ánh sáng huỳnhquang cho tới detector; sau cuối những detector sẽ tạo nên ra biểu thị năng lượng điện tỉ lệ thuậnvới bộc lộ quang học.
Cácnguyên tố bao gồm của sản phẩm flow cytometer (đếm tế bào theo cái chảy) cùng cellsorter (phân các loại tế bào) gồm những: hệ dung dịch, hệ thống quang đãng học tập (ánh sángkích ưa thích cùng cỗ thu ánh sáng kích thích), mạng lưới năng lượng điện (detector) với một máytính. Hệ thống hỗn hợp bao gồm trách nhiệm điều phối cái hỗn hợp cất các hạtcho tới mối cung cấp sáng sủa. Hệ thống quang đãng học tập kích mê thích đã tập trung nguồn sáng sủa tới các tếbào/ các hạt, còn khối hệ thống quang đãng học tập thu dìm đang chuyển các tia nắng tán xạ hoặcánh nắng huỳnh quang quẻ cho tới màng lưới điện tử. Mạng lưới điện sẽ phát hiện tín hiệuvà đưa những biểu thị thành các đọc tin số tỉ trọng thuận cùng với độ mạnh ánh sángvới máy tính xách tay đang phân tích các thông báo này.
Kỹthuật flow cytometry được thực hiện rộng rãi trong vô số nhiều áp dụng nhằm mục đích phạt hiệncác kháng ngulặng màng, tế bào chất cùng nhân. Bên cạnh đó, toàn thể tế bào với các thànhphần tế bào như bào quan liêu, nhân, DNA, RNA, lây truyền sắc đẹp thể, cytokines, hooc môn vàprotein có thể được phân phát hiện tại trải qua kỹ thuật này. Việc so với những quátrình trong tế bào với chu trình tế bào nhờ việc đo lượng calcium và điện thếmàng cũng là một trong trong các áp dụng của flow cytometry. Bài viết tiếp sau đây sẽtrình bày kỹ hơn về các thành phần của một đồ vật flow cytometry.
Hệthống hỗn hợp bao gồm mục đích chuyên chở các tế bào trong một dung dịch trải qua thiếtbị nhằm nhận được những tài liệu, khối hệ thống này bao gồm 2 thành phần: sheath fluid (dòngdung dịch bảo vệ/ mẫu dung dịch mặt ngoài) cùng pressurized line (mẫu áp suất).Sheath fluid là 1 dung dịch trộn loãng (thường thì là đệm PBS- phosphate-bufferedsaline), được tiêm vào phòng flow nằm ở trung trung tâm của sản phẩm công nghệ vì chưng loại áp suất.Một áp suất không gian cũng được tiêm vào những tế bào đã có được phối hợp trong ống mẫuvào bên trong phòng flow. Dòng mẫu sẽ được đưa vào lõi trung trung ương cơ mà xung quanglà dòng dung dịch đảm bảo cùng biến chuyển cái lõi (core fluid- một loại hết sức hạn hẹp chỉđể từng tế bào hoặc từng phân tử đi qua), được tạo ra dựa trên sự khác biệt áp suấtgiữa dòng hỗn hợp bên ngoài (sheath fluid) và loại mẫu (sample fluid), từ đógiúp tập trung tế bào/hạt có trong mẫu mã thành chiếc tế bào đối kháng nhằm trải qua chùm tialaze. Do kia, quá trình này chất nhận được thắp sáng đồng rất nhiều từng tế bào bắt buộc được gọilà quy trình triệu tập tdiệt hễ lực học tập (hydrodynamic focusing).
Xem thêm: Phương Pháp Ahp Là Gì ? Định Nghĩa, Ví Dụ, Giải Thích (Tiếng Việt) “Ứng Dụng
Tỷlệ đưa những tế bào vào chùm tia tia laze rất có thể được triển khai dựa vào khối hệ thống lắp thêm flowcytometer dựa trên mục đích của so với. ví dụ như, tỉ lệ thành phần loại rã cao thường xuyên sửdụng mang đến Việc giám sát và đo lường như immunophenotyping ngơi nghỉ tế bào động vật bao gồm vú, trong khiđó, tỉ lệ dòng chảy rẻ thường xuyên yêu thích phù hợp với những vận dụng từng trải độ phân giảicao nlỗi so với yếu tắc DNA. Các thông số kỹ thuật đặc biệt quan trọng cần thiết nhận được nhờsự tiếp xúc các hạt cùng với chùm tia tia laze dựa vào vào hoạt động về tối ưu của các hệthống hỗn hợp. Do đó, cần phải đảm bảo rằng không có khủng hoảng bong bóng khí cùng những mảnhvụn trong hệ thống này nhằm áp lực vẫn đồng phần đa làm việc hầu hết thời hạn.
Hệthống quang quẻ học tập vào máy flow cytometry làm cho trách nhiệm chiếu ánh sáng kích thíchbao hàm đèn Laser, thấu kính với phần tử thu ánh nắng. Thấu kính tất cả vai trò địnhhình và tập trung chùm tia tia laze. Ánh sáng Laser được tạo nên bằng cách kích thíchnhững điện tử (electron) vẫn ngơi nghỉ trạng thái cơ bạn dạng lên trạng thái kích thích hợp tất cả mứctích điện cao nhờ vào năng lượng điện áp, sau đó 1 thời hạn nđính thêm (thường xuyên là 10-7 –10-8 giây), các điện tử vẫn trsinh hoạt về trạng thái cơ bản với phân phát ra nănglượng dưới dạng những photon ánh nắng. Sau Lúc tia laze hấp thụ vào tế bào, phần lớn ánhsáng bị chệch phía đối với đường tryền trực tiếp bởi chạm mặt cần đồ gia dụng cản trở được gọi làtia nắng tán xạ. Có nhì các loại ánh sáng tán xạ là forward scatter (FSC) với sidescatter (SSC). Các yếu tố ảnh hưởng đến sự tán xạ ánh nắng là màng tế bào,nhân, các phân tử của tế bào, bản thiết kế với mặt phẳng tế bào. Nhìn phổ biến form size củatế bào hoặc của một phân tử cùng độ tinh vi bên trong tế bào được quánh hiệu vì chưng loạitán xạ. Ánh sáng sủa FSC là kết quả của sự việc nhiễu xạ thu được dọc theo trục của chùmtia tới tia laze. FSC tỉ trọng với diện tích S mặt phẳng hoặc kích thước tế bào với phù hợpnhằm phân phát hiện nay, khác nhau những phân tử về kích cỡ, hay thực hiện thịnh hành trongimmuophenotyping. Còn tia nắng SSC bao gồm hầu hết những ánh sáng khúc xạ cùng nhiễuxạ, được thu ở góc cạnh 90o đối với chùm tia tới Laser. SSC tỉ trọng với thànhphần các phân tử hoặc độ phức tạp bên phía trong tế bào. Hình như, ánh nắng huỳnhquang tất cả nguồn gốc trường đoản cú kháng thể hoặc dye đánh dấu huỳnh quang quẻ như thể PI cũng đượcsự phản xạ tại và một góc cùng với SSC.
Hình 2: Ánh sáng tán xạ (lightscattering). FSC tỉ lệ cùng với form size, trong những khi kia SSC tỉ trọng với những thành phầnvới độ phức hợp bên phía trong tế bào.
Córất nhiều cấu hình laze vào sản phẩm công nghệ flow cytometer dựa trên nhiều loại chất huỳnh quangđược kích ưng ý. Đèn argon laze (một đèn Laser thường thì với bước sóng kíchyêu thích 488 nm) được sử dụng nhằm kích mê thích nhiều dye tổng vừa lòng nlỗi fluoresceinisothiocyanate (FITC) cùng dye huỳnh quang đãng tự nhiên và thoải mái nhỏng tảo với phytoplankton. Rấtcác thiết bị flow cytometer cùng sorter bao gồm thêm đèn laze có công dụng kích say đắm chấthuỳnh quang đãng sinh sống bước sóng kích mê thích ở dải sóng UV (300-400nm) hoặc red diodekích ham mê chất huỳnh quang đãng nghỉ ngơi dải sóng đỏ (630 nm).
Hệthống thu dấn ánh nắng bao gồm thấu kính để thu tia nắng phân phát ra từ bỏ sự tương tácthân chùm tia Laser và hạt; một khối hệ thống gương cùng kính thanh lọc để bóc với tiếp đến hướngtia nắng bao gồm bước sóng đặc hiệu đến detector thích hợp.
